天根細(xì)菌基因組dna提取試劑盒簡(jiǎn)介：

本試劑盒采用可以高效、專一結(jié)合 DNA 的離心吸附柱和dute的緩沖液系統(tǒng)，既適用于革蘭氏陰性菌基因組 DNA 的提取，也可適用于革蘭氏陽(yáng)性菌基因組 DNA 的提取。本試劑盒也可用于食品致病菌(微生物)基因組提取，如：金黃色葡萄球菌、霍亂弧菌、出血性大腸桿菌 O157：H7、單增李斯特、沙門氏菌、阪崎腸肝菌等?？蓮?-5 ml細(xì)菌培養(yǎng)液中，快速提取純化10-40μg純凈的基因組 DNA，所得基因組 DNA 可直接用作 PCR 模板、酶切、雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

天根細(xì)菌基因組dna提取試劑盒特點(diǎn)：

★ 簡(jiǎn)單快速：革蘭氏陰性菌在1h內(nèi)可獲得高純的基因組DNA。

★ 純度高：獲得的DNA純度高，可直接用于PCR、酶切、雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

天根細(xì)菌基因組dna提取試劑盒下游應(yīng)用：

★ 革蘭氏陰性菌基因組提取

★ 革蘭氏陽(yáng)性菌基因組提取

★ 食品中致病菌基因組提取

天根細(xì)菌基因組dna提取試劑盒操作步驟：

1.取細(xì)菌培養(yǎng)液1-5 ml,10,000 rpm(~11,500×g)離心1min,盡量吸凈上清。

2.向菌體沉淀中加入200μl緩沖液GA,振蕩至菌體chedi懸浮。

注意：對(duì)于較難破壁的革蘭氏陽(yáng)性菌，可略過(guò)第2步驟，加入溶菌酶溶液進(jìn)行破壁處理，具體方法為：加入110μl緩沖液(20 mM Tris,pH 8.0; 2 mM Na?-EDTA;1.2%Triton),和70μl溶菌酶溶液(50 mg/ml,貨號(hào)：RT401),37 ℃處理30min以上。如果需要去除RNA,可加入4μl RNase A(100 mg/ml)溶液(貨號(hào)：RT405-12),振蕩15 sec,室溫放置5 min。

3.向管中加入20μl Proteinase K溶液，混勻。

4.加入220μl緩沖液GB,振蕩15 sec,70 ℃放置10 min,溶液應(yīng)變清亮，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

注意：加入緩沖液GB時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說(shuō)明細(xì)胞裂解不chedi，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA不純。

5.加220μl無(wú)水乙醇，充分振蕩混勻15 sec,此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

6.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm(~13,400×g)離心30 sec,倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。

7.向吸附柱CB3中加入500μl緩沖液GD(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12,000 pm(~13,400×g)離心30 sec,倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。

8.向吸附柱CB3中加入600μl漂洗液PW(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)離心30 sec,倒掉廢液，吸附柱CB3放入收集管中。

9.重復(fù)操作步驟8。

10.將吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,倒掉廢液。將吸附柱CB3置于室溫放置數(shù)分鐘，以chedi晾干吸附材料中殘余的漂洗液。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)(酶切、PCR等)實(shí)驗(yàn)。

11.將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200μl洗脫緩沖液TE,室溫放置2-5 min,12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,將溶液收集到離心管中。

注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50 μl,體積過(guò)小影響回收效率。洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用ddH?O做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。為增加基因組DNA的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室溫放置2 min,12,000rpm(~13,400×g )離心2 min。

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