日韩免费视频一区二区三区视频,久久人妻内射无码一区三区,日韩第一精品二区三区,成人无码久久久久毛片

免費(fèi)咨詢(xún)熱線:
技術(shù)文章
首頁(yè) > 技術(shù)中心 > PCR引物設(shè)計(jì)的關(guān)鍵點(diǎn)有哪些?

PCR引物設(shè)計(jì)的關(guān)鍵點(diǎn)有哪些?

 更新時(shí)間:2023-10-16 點(diǎn)擊量:707

PCR引物是人工合成的一段寡聚核苷酸。引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,因此,PCR的首要任務(wù)就是引物設(shè)計(jì)。那么你知道PCR引物設(shè)計(jì)的關(guān)鍵點(diǎn)有哪些嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!

一、引物最好在模板cDNA 的保守區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)

DNA序列的保守區(qū)是通過(guò)物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因,通過(guò)序列分析軟件(比如DNAman)比對(duì)(Alignment),各基因相同的序列就是該基因的保守區(qū)。

二、引物長(zhǎng)度一般在15~30 堿基之間

引物長(zhǎng)度(primer length)常用的是18-27 bp,但不應(yīng)大于38,因?yàn)檫^(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致其延伸溫度大于74℃,不適于Taq DNA 聚合酶進(jìn)行反應(yīng)。

三、引物GC 含量在40%~60%之間,Tm 值最好接近72℃

GC含量(composition)過(guò)高或過(guò)低都不利于引發(fā)反應(yīng)。上下游引物的GC含量不能相差太大。另外,上下游引物的Tm值(melting temperature)是寡核苷酸的解鏈溫度,即在一定鹽濃度條件下,50%寡核苷酸雙鏈解鏈的溫度。有效啟動(dòng)溫度,一般高于Tm值5~10℃。若按公式Tm= 4(G+C)+2(A+T)估計(jì)引物的Tm 值,則有效引物的Tm為55~80℃,其Tm值最好接近72℃以使復(fù)性條件最佳。

四、引物3′端要避開(kāi)密碼子的第3 位

如擴(kuò)增編碼區(qū)域,引物3′端不要終止于密碼子的第3位,因密碼子的第3位易發(fā)生簡(jiǎn)并,會(huì)影響擴(kuò)增的特異性與效率。

五、引物3′端不能選擇A,最好選擇T

引物3′端錯(cuò)配時(shí),不同堿基引發(fā)效率存在著很大的差異,當(dāng)末位的堿基為A 時(shí),即使在錯(cuò)配的情況下,也能有引發(fā)鏈的合成,而當(dāng)末位鏈為T(mén) 時(shí),錯(cuò)配的引發(fā)效率大大降低,G、C 錯(cuò)配的引發(fā)效率介于A、T 之間,所以3′端最好選擇T。

六、引物應(yīng)具有特異性

引物設(shè)計(jì)完成以后,應(yīng)對(duì)其進(jìn)行BLAST 檢測(cè)。如果與其它基因不具有互補(bǔ)性,就可以進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)了。

更多有關(guān)PCR引物設(shè)計(jì)的關(guān)鍵點(diǎn),請(qǐng)聯(lián)系北京百奧創(chuàng)新科技有限公司:


欧美精品国产系列一二三国产真人-在线观看国产午夜视频| 极品人妻av在线播放-久久精品视频一区二区三区| 欧美精品国产系列一二三国产真人-在线观看国产午夜视频| 色噜噜噜噜一区二区三区-欧美最猛黑人做爰视频| 国产av剧情护士麻豆-三级国产精品欧美在线观看| 午夜精品午夜福利在线-内射无套内射国产精品视频| 久久特一级av黄色片-91社区视频免费观看| 在线观看中午中文乱码-2021国产一级在线观看| 亚洲另类自拍唯美另类-99国产精品兔免久久| 日韩毛片在线免费人视频-超碰中文字幕av在线| 91亚洲美女视频在线-熟妇人妻精品一区二区三区蜜臀| 亚洲黑人欧美一区二区三区-亚洲一区二区三区免费视频播放| 91亚洲美女视频在线-熟妇人妻精品一区二区三区蜜臀| 男女做爰猛烈啪啪吃奶在线观看-人妻连裤丝袜中文字幕| 亚洲欧美激情自拍色图-国产亚洲精品sese在线播放| 可以免费看污污视频的网站-日韩欧美不卡视频在线观看| 91蜜桃传媒一二三区-日韩欧美国产一区呦呦| 97人妻精品一区二区三区爱与-日韩精品亚洲专区在线观看| 国产福利视频一区二区三区-日韩人妻中文视频精品| 国产人妻人伦精品日本-国产98超碰人人做人人爱| 中文字幕社区电影成人-欧美精美视频一区二区三区| 国产一区二区无套内射-国内精品久久久久久久齐pp| 欧美日韩黑人在线播放-51在线精品免费视频观看| 麻豆久久国产精品亚洲-日本理论中文字幕在线视频| 国产欧美日本不卡精美视频-日本后入视频在线观看| hd在线观看一区二区-免费一区二区三区毛片在线| 国产黄片在现免费观看-色老板最新在线播放一区二区三区| 亚洲视频一区二区三区免费-国产一级黄色大片在线| 久久蜜桃精品一区二区-麻豆视频啊啊啊好舒服| 日韩欧美国产综合久久-国产精品一起草在线观看| 久久99热这里都是精品啊-国产成人亚洲精品无码aV| 亚洲综合av一区二区三区-高潮又爽又黄无遮挡激情视频| 韩漫一区二区在线观看-精品国产免费未成女一区二区三区| 日韩综合精品一区二区-丝袜美腿熟女人妻经典三级| 极品人妻av在线播放-久久精品视频一区二区三区| 黄片黄片在线免费观看-激情综合网激情五月俺也去| 婷婷亚洲欧美综合丁香亚洲-超刺激国语对白在线视频| 欧美一级二级三级在线看-日韩精品欧美嫩草久久99| 久久久噜噜噜久久狠狠50岁-精品一区二区三区av| 亚洲av成人一区国产精品网-国产偷_久久一级精品a免费| 女主播啪啪大秀免费观看-精品99午夜福利影院|