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Elabscience一步法TUNEL原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒的常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法有什么

 更新時(shí)間:2023-12-22 點(diǎn)擊量:885

Elabscience® One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit 是一款靈敏度高且能快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)細(xì)胞凋亡的產(chǎn)品。本試劑盒適用于組織樣本(石蠟切片、冰凍切片)和細(xì)胞樣本(細(xì)胞涂片、細(xì)胞爬片)的原位凋亡檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果可通過(guò)熒光顯微鏡直接觀察。那么你知道Elabscience一步法TUNEL原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒的常見(jiàn)問(wèn)題有什么嗎?該如何解決呢?讓我們一起來(lái)看看吧!

一、非特異性染色

原因:

1. TdT酶的濃度過(guò)高。

2. TdT酶反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或TdT酶反應(yīng)過(guò)程中反應(yīng)液滲漏,細(xì)胞或組織表面不能保持濕潤(rùn)。

3. 光照紫外線導(dǎo)致包埋試劑的聚合(如:甲基丙烯酸會(huì)導(dǎo)致樣本DNA的斷裂)。

4. 在固定組織時(shí)樣本 DNA 已斷裂(內(nèi)源核酸酶的作用)。

5. 使用了不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ?,例如一些酸性固定液?/span>

6. 固定后某些核酸酶活性依然較高導(dǎo)致 DNA 斷裂。

解決方法:

1. TdT Equilibration Buffer1:2~1:10稀釋。

2. 注意控制反應(yīng)時(shí)間,并 確保TdT酶反應(yīng)液能很好地覆蓋樣品。

3. 嘗試改用其它包埋材料或其它聚合試劑。

4. 確保樣品取樣后立即固定或通過(guò)肝靜脈灌注固定。

5. 采用推薦的固定液。

6. 用含有dUTPdAPT的溶液封閉。

二、標(biāo)記率低

原因:

1. 如果以乙醇或甲醇固定的樣本則標(biāo)記效率較低(因?yàn)樵诠潭〞r(shí)染色質(zhì)未能與蛋白質(zhì)交聯(lián),而在操作中丟失)。

2. 固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng),導(dǎo)致交聯(lián)程度過(guò)高。

3. 石蠟切片脫蠟不充分。

4. 熒光淬滅。

5. 通透條件不佳,以致于試劑不能到達(dá)靶分子或濃度過(guò)低。

解決方法:

1. 用溶于 PBS pH7.4中的4%多聚甲醛固定或福爾馬林或戊二醛固定。

2. 減少固定時(shí)間,或用溶于PBS pH7.42%多聚甲醛固定。

3. 延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間;更換新的脫蠟液。

4. 注意避光操作。

5. 增加通透時(shí)間;優(yōu)化蛋白酶K的作用濃度和作用時(shí)間。

三、組織樣本脫落

原因:

組織樣本被酶從載玻片上消化下來(lái)。

解決方法:

降低蛋白酶K的處理時(shí)間。

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