細(xì)胞培養(yǎng)中的消化傳代操作是指將細(xì)胞從當(dāng)前的培養(yǎng)瓶、皿中分離出來(lái)，經(jīng)過消化處理后，分散到新的培養(yǎng)瓶、皿中進(jìn)行繼續(xù)培養(yǎng)。那么你知道細(xì)胞消化的注意事項(xiàng)有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

　　一、胰蛋白酶的選擇

　　EDTA是一種螯合劑，可以與金屬離子結(jié)合。含有EDTA的胰蛋白酶除了具有胰蛋白酶的消化作用外，還具有螯合金屬離子的作用。在細(xì)胞培養(yǎng)中，含有EDTA的胰蛋白酶，通過螯合細(xì)胞表面的鈣離子，破壞細(xì)胞與細(xì)胞之間的黏附作用，從而使細(xì)胞分離出來(lái)。

　　因此，如果需要進(jìn)行細(xì)胞解離和分離操作，可以選擇含有EDTA的胰蛋白酶；如果只需要進(jìn)行消化傳代操作，可以選擇不含EDTA的胰蛋白酶。

　　二、消化時(shí)間的掌握

　　消化時(shí)間的長(zhǎng)短會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和狀態(tài)。如果消化時(shí)間過長(zhǎng)，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡或者受損；如果消化時(shí)間過短，則可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞未能完q分散，影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化。但細(xì)胞多長(zhǎng)時(shí)間能被消化下來(lái)，并不完q取決于胰蛋白酶，還和消化的溫度、細(xì)胞的密度、以及消化環(huán)境有關(guān)。

　　通常，37°C下進(jìn)行消化可以縮短消化時(shí)間。我們的胰蛋白酶平時(shí)一般放在冰箱內(nèi)，在消化操作之前，可以提前拿出。加入胰蛋白酶后，可以把培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行消化，這樣可以有效縮短消化時(shí)間。另外，不應(yīng)該在細(xì)胞密度太高時(shí)才想起來(lái)進(jìn)行消化傳代。當(dāng)密度太高時(shí)，細(xì)胞之間的黏連會(huì)加劇，此時(shí)同等的消化條件，會(huì)需要花費(fèi)更多的時(shí)間進(jìn)行消化，進(jìn)一步提高了判斷消化進(jìn)度的難度。比較合理的傳代密度應(yīng)該在70-80%之間。

　　三、其他注意事項(xiàng)

　　在加入胰蛋白酶之前，通常會(huì)使用pbs進(jìn)行潤(rùn)洗，潤(rùn)洗后，應(yīng)該徹d扔棄瓶?jī)?nèi)的pbs后，再加入胰蛋白酶進(jìn)行消化。

　　加入胰蛋白酶的量應(yīng)該是剛剛沒過整個(gè)培養(yǎng)瓶底部即可。

　　在消化過程中，如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞解離太快，可以把培養(yǎng)瓶豎起來(lái)，讓瓶壁上殘留的消化液進(jìn)行消化。

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