細(xì)胞污染在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,非常常見。目前為止,防止細(xì)胞污染的首要手段是預(yù)防。細(xì)胞污染通常會(huì)出現(xiàn)在生物安全柜和培養(yǎng)箱這兩個(gè)地方,因此,如何做好這兩個(gè)地方的預(yù)防措施呢?
一、所有進(jìn)入安全柜的東西都要盡可能保證無(wú)菌
直接購(gòu)買商用試劑和耗材是穩(wěn)定的方式,如Gibco、中科百抗的血清,Corning的耗材等,這些品牌的試劑和耗材一般只要是正品都可以保證無(wú)菌。若自己配制的試劑,那么在配制中需要嚴(yán)格按無(wú)菌操作進(jìn)行。
二、分裝的試劑建議過(guò)濾一次
試劑在分裝時(shí)可以考慮再用針頭式過(guò)濾器過(guò)濾一次,減少污染的可能性。
三、安全柜每次使用前需要滅菌、換氣
生物安全柜在每次使用前需要紫外照射30min滅菌,然后通風(fēng)5min以上保證換氣到位。
四、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中注意試劑的封蓋問(wèn)題
實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所有試劑不用時(shí)需要蓋上瓶蓋,瓶蓋打開時(shí)除了干凈的吸頭,其他任何東西都不要從瓶口的上方經(jīng)過(guò)。如果使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)胞,則處理時(shí)不要長(zhǎng)時(shí)間打開皿蓋。
五、培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)胞操作要輕柔
如果使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)胞,放入培養(yǎng)箱前搖勻時(shí)要輕柔,不要將培養(yǎng)基搖到皿蓋和皿身的間隙中,這樣在細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)很容易污染。
六、及時(shí)清理污染的細(xì)胞
晚期污染則是細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,細(xì)胞停止生長(zhǎng),顯微鏡下可見大量微生物。這時(shí)候建議大家及時(shí)清理掉相關(guān)細(xì)胞,以免污染其他細(xì)胞。在對(duì)安全柜和培養(yǎng)箱進(jìn)行消毒后,再重新復(fù)蘇早批次的細(xì)胞。
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